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Ca++Mg++-ATP酶檢測試劑盒（可見分光光度法50T/24S）
| 貨號 | SH0254 | 售價（元） | 276 |
| 規(guī)格 | 50T/24S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0254 |
Ca++Mg++-ATP酶檢測試劑盒（可見分光光度法50T/24S） |
50管/24樣 |
測定意義：
Ca++ Mg++-ATP酶廣泛分布于植物、動物、微生物和細胞中，可催化ATP水解生成ADP和無機磷。
測定原理：
根據(jù)Ca++ Mg++-ATP酶分解ATP生成ADP及無機磷，通過測定無機磷的量來確定ATP酶活性高低。
試劑的組成和配制：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0254-50T/24S |
Storage |
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提取液：液體 |
50ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
10ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
5ml |
4℃ |
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試劑三：液體 |
5ml |
4℃ |
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試劑四：粉劑 |
1支×3 |
-20℃ |
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試劑五：液體 |
5ml |
4℃ |
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試劑六：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑七：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑八：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑九：液體 |
25ml |
室溫 |
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試劑十：10mmol/L標準磷貯備液 |
10ml |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑四：粉劑×3 支，-20℃保存。用時每支加1ml蒸餾水，現(xiàn)用現(xiàn)配；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
試劑六：粉劑×1瓶，4℃保存。用時加入3ml蒸餾水， 4℃保存；
試劑七：粉劑×1瓶, 4℃保存。用時加入25ml蒸餾水，溶解后4℃保存一周；
試劑八：粉劑×1瓶, 4℃保存。用時加入25ml蒸餾水，溶解后4℃保存一周；
0.5μmol/ml標準磷應用液配制：將試劑十 20倍稀釋，即取 0.1ml試劑十加1.9ml蒸餾水充分混勻；
定磷劑的配制：按H2O: 試劑七:試劑八:試劑九=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷劑應為淺黃色。若無色則試劑失效，若是藍色則為磷污染，定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。
注意：配試劑最好用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
需自備的儀器及用品:
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
樣品酶液的制備：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
操作步驟：
1、 分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至660nm，蒸餾水調零；
2、 加樣表(在1.5ml棕色EP管中按下表依次加樣）；
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試劑名稱(μl) |
對照管 |
測定管 |
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試劑一（μl） |
130 |
90 |
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試劑二（μl） |
40 |
40 |
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試劑三（μl） |
40 |
40 |
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試劑四（μl） |
40 |
40 |
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試劑五（μl） |
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40 |
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樣本 （μl） |
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200 |
混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）準確水浴10min
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試劑六（μl） |
50 |
50 |
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樣本 （μl） |
200 |
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混勻，8000g，25℃離心10min，取上清液
3定磷（1.5mlEP管中依次加入下列試劑）
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空白管 |
標準管 |
對照管 |
測定管 |
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0.5μmol/ml標準磷應用液（μl） |
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100 |
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上清液（μl） |
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100 |
100 |
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蒸餾水（μl） |
100 |
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定磷試劑（μl） |
1000 |
1000 |
1000 |
1000 |
混勻，室溫放置30 min，在 660nm處比色。
注意事項：
1、由于每一個樣都必須做對照，本試劑盒50管只能測 24份Ca++ Mg++-ATP酶。
2、此法具有微量、靈敏、快速的特點。所以對測定所用試管要求嚴格無磷。避免磷污染是檢測成敗的關鍵。
3、空白管和標準管只要做一管。
計算：
1、血清（漿）Ca++ Mg++- ATPase活力的計算:
定義：規(guī)定每小時每毫升血清（漿）中Ca++ Mg++- ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。
Ca++ Mg++-ATP酶活力（μmol /h/ mL）=[ C標準管×V總]×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）÷V樣÷T=7.5×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）
組織中Ca++ Mg++- ATPase的計算：
2、組織、細菌或細胞中Ca++ Mg++- ATPase活力的計算：
（1）按蛋白濃度計算：
定義：每小時每毫克組織蛋白中Ca++ Mg++- ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。
Ca++ Mg++-ATP酶活力(μmol/h/mg)=[C標準管×V總]×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）÷（V樣×Cpr）÷T =7.5×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
定義：每小時每克組織中Ca++ Mg++-ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。
Ca++ Mg++-ATP酶活力(μmol/h/g)= [C標準管×V總]×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）÷(W× V樣÷V樣總)÷T=7.5×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
定義：規(guī)定每小時每1萬個細菌或細胞中Ca++ Mg++-ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。
Ca++ Mg++-ATP酶活力(μmol/h /104)= [C標準管×V總]×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.015×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）
C標準管：標準管濃度，0.5μmol/mL；V總：酶促反應總體積，0.5mL；V樣：加入樣本體積，0.2mL ；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應時間，1/6小時；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。